SARS-CoV-2的S蛋白是病毒进入的关键结构和功能成分。由于病毒的不断变异,就目前而言,预防和控制COVID-19的方法非常有限。
由于mRNA和腺病毒DNA产品是在不知道身体会如何或何时分解遗传密码的情况下“仓促”推出的。而脂质纳米颗粒上携带的合成mRNA似乎在设计上就对人类核糖核酸酶的分解具有抵抗力,也就是说,该产品将是“持久耐用”的,并在相当长的一段时间内产生感兴趣的蛋白质产物。
这对于在罕见遗传缺陷状态下(例如,法布里氏病中的α半乳糖苷酶)被替换的正常人类蛋白质来说,是一个“优势”。但当蛋白质是致病性SARS-CoV-2刺突(spike)时,就成了是一个大问题!腺病毒DNA (强生,Janssen)本应该被脱氧核糖核酸酶分解,遗憾的是,迄今为止,它还没有被详尽地研究。
这使得刺突蛋白的分解成为疫苗损伤的治疗目标。在呼吸道感染中,spike被细胞蛋白酶(包括跨膜丝氨酸蛋白2、组织蛋白酶和弗林)处理和激活。通过接种疫苗,这些系统可以通过全身给药和细胞内产生刺突蛋白来避免。也因此,疫苗损伤综合征的发病机制被认为是由细胞、组织和器官中刺突蛋白的积累所驱动的。
随着COVID-19疫苗接种者逐渐意识到,他们的身体在基因上已携带经过辉瑞或Moderna修饰的原始covid-19刺突蛋白(约70%同源),出于担心,人们正寻找这种致命蛋白质的解毒方法,这种蛋白质已被证明会导致心脏损伤、神经损伤、血栓等器官病变,从长远来看,还可能导致更多问题。
现在,从那些已接种 COVID-19 疫苗的人那里得到的最常见问题是:“我如何将其从体内排出...
纳豆激酶“排毒”
纳豆激酶是一种通过由大豆与细菌枯草芽孢杆菌变异纳豆发酵产生,并已作为口服补充剂使用,能降解纤维蛋白原、因子VII、细胞因子和因子VIII,同时对其心血管益处进行了研究。通过实践可用疗法中,在所有建议的解毒剂中,纳豆激酶和相关肽被认为是目前最大的希望。
https://www.researchgate.net/publication/362916149_Degradative_Effect_of_Nattokinase_on_Spike_Protein_of_SARS-CoV-2日本的谷川博士等人研究了纳豆激酶对SARS-CoV-2刺突蛋白的影响。在首次实验中,证明在可能类似于疫苗受体的细胞裂解物制剂中,刺突以时间和剂量依赖性的方式被降解。二次实验再次显示,纳豆激酶降解了SARS-CoV-2感染细胞中的刺突蛋白。
纳豆激酶以每克纤维蛋白溶解单位(FU)给药,可根据纯度而变化。研究发现,参与者在6小时和8小时单次口服剂量为2000 FU D-二聚体浓度后,血纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物在给药4小时后显著升高(p < 0.05)。
纳豆激酶对细胞表面S蛋白的降解作用
图注:纳豆激酶对细胞表面S蛋白的降解作用。用HEK293细胞转染刺突-pcDNA3.1并孵育9h。孵育后,将纳豆激酶(25和2.5µg/mL)加入培养液中,继续孵育13小时。固定细胞并进行免疫荧光分析。细胞表面的S蛋白用抗刺突蛋白抗体(红色)染色,细胞核用DAPI(蓝色)染色。(B)S蛋白面积与细胞核正面积之比。每个样品采集3张图像,并计算S蛋白/细胞核阳性区域。数据显示为平均值+SD,p值通过单因素方差分析(ANOVA) 确定,使用 R 软件(Windows 为 R-3.3.3)进行 Tukey 事后检验(** p< 0.01;*** p< 0.001)。(C)通过MTT测定评估细胞活力。将指示的纳豆激酶加入培养基中并孵育13小时;进行MTT测定https://www.researchgate.net/publication/362916149_Degradative_Effect_of_Nattokinase_on_Spike_Protein_of_SARS-CoV-2研究结果显示,纳豆激酶的蛋白酶活性不仅有助于S蛋白的降解,还对宿主细胞中的ACE2也有降解作用。
除了纳豆激酶对SARS-CoV-2 S蛋白具有强大的降解活性,它还被证明具有抗动脉粥样硬化、降脂、降脂、抗高血压、抗血栓、纤维蛋白溶解、神经保护、抗血小板和抗凝血作用。
患有高血压和心血管合并症的患者很容易因COVID-19而加重病情,再加之由于SARS-CoV-2的多种变异,包括具有突变疫苗靶位表位的菌株,仅凭接种疫苗可能无法完全预防SARS-CoV-2感染。因此,纳豆激酶和纳豆提取物有可能被开发为预防和治疗COVID-19的新一代药物。
至于口服剂量,经验起始剂量可以是 2000 FU,每天2次。只是完整的药代动力学和药效学研究尚未完成,但几年来作为非处方补充剂的市场使用表明纳豆激酶是安全的,主要警告是出血过多、及同时使用抗血小板和抗凝药物。
眼前的问题是时间紧迫性,类似于SARS-CoV-2感染和经验性早期治疗。要拥有完全成熟的药物概况来表征纳豆激酶在治疗疫苗损伤和 COVID 后综合征方面的安全性和有效性,将需要长达 20 年的时间!
通过静脉注射刺突蛋白解毒的希望
最近,科学家在Spike中发现了一些漏洞,包括蛋白水解切割位点,其中蛋白质可以被可能适合药物开发的酶分解。在自然界中,包括蠕虫在内的这种酶有许多来源。
日本多毛类河流蠕虫,Neanthes japonica (Izuka)是一种已知的碱性丝氨酸蛋白酶的来源,简写为ASPNJ,其中“N”代表Neanthes japonica。研究人员利用发现的Spike蛋白弱点,对其序列进行“改进”以符合ASPNJ对其水解。”虽然目标是SARS-CoV-2的野生型Spike蛋白,但目前尚不清楚当前的Omicron菌株或经过修改的辉瑞和Moderna版本的Spike是否具有这些相同的水解位点。
图注:不同浓度ASPNJ对S蛋白、S1蛋白和RBD-mouseFc的降解:(a) S的降解;(b) S1的降解;(c) RBD-小鼠Fc (Rm)降解。S、S1、Rm的浓度均为10 μg/lane。a1 ~ a5为不同浓度ASPNJ/lane (a1 ~ a5分别为50(或30)、1、0.2、0.04、0.008 μg/lane);将ASPNJ总体积为25 μL,将ASPNJ总体积为25 μL的三种蛋白质中的每一种在40 °C条件下降解1h,并通过运行SDS-PAGE观察降解效果。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8954242/#app1-molecules-27-01882结果发现,APSNJ甚至在几分钟内就降解了低浓度的Spike,被认为可用于静脉注射药物开发。实验室的下一步计划将是重复对当前Omicron菌株,辉瑞和Moderna Spike蛋白家族的实验,并确定是否存在相等的溶解度。
虽然公众一直在抨击“大型制药公司”在 COVID-19 疫苗中的欺诈和腐败,但该行业迫切需要介入并开发解毒剂或其它方法的研发,以改善疫苗接种或 COVID-19 后综合征对人体的 Spike 蛋白损伤。